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讲述FGF-23试剂盒的测试流程

2019-01-22 浏览次数:375

       FGF-23试剂盒用于测定血清,血浆及相关液体等样本,例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。
      FGF-23试剂盒的测试流程如下:
      1、待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。 
      2、酶标板置4℃,包被过夜。
      3、洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍将洗涤液注满板孔后,即甩去,之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
      4、阴性对照孔每孔加入pbs 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人aif抗体工作液50μl。 
      5、酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。 
      6、洗板,同4。 
      7、每孔加1:5000稀释的hrp-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。 
      8、酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。 
      9、洗板,同4。 
      10、每孔加tmb显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。 
      11、每孔加100μl 2mol/l h2so4终止反应。 
      12、分别测450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2,终测得的od值为两者之差w1-w2,以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
      13、数据处理:在得出标本s和阴性对照n的 od值后,计算s/n值。s/n≥2.1为阳性判定标准。
      注意用于FGF-23测试的标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
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