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粪便钙卫蛋白检测试剂盒操作步骤

2017-02-04 浏览次数:1347

一.样本采集和储存

1、采便盒采集新鲜粪便样本。固体约20g或稀便约20ml(约粪便盒的三分之一)

25天内4℃保存,5天至1月内-20℃保存,1月以上-70℃长时间保存

 

二.提取程序

1、定量管螺纹一端插入粪便,使螺纹填满,插入定量管中并拧紧,确保螺纹被填满,(约13mg粪便)

2、若样本为水样,直接用移液枪吸取13ul13mg到定量管,若样本为粘稠的胶状便,建议采用电子天平称量定量

3、拧开定量管另一端,加入650ul样本提取液1:50倍稀释),涡旋震荡5-10min,直到螺纹上粪便样本完全溶解

4、将震荡好的萃取液从滤头处挤出上清,滴入1。5ml EP管内,取10ul加入到1500ul孵育缓冲液150倍稀释)

 

三.钙卫蛋白试剂盒ELISA步骤

1、将试剂盒平衡至室温

2、将96孔板清洗2遍,甩干(注意:洗后不能放置时间过长;可不用洗板操作)

3、分别吸取100ul稀释后的样本、标准品及质控品

4、用封膜封板,置于水平摇床,18-28°C 孵育30-60分钟,400/分钟

5、清洗4

6、每孔均加入100ul酶结合物

7、用封膜封板,置于水平摇床上,18-28°C 孵育30-60分钟,400/分钟

8、清洗5遍,甩干

9、每孔均加入100ul TMB底物液

10、用封膜封板,置于水平摇床上,避光,18-28°C孵育15分钟,400/分钟

11、每孔均加入100ul终止液终止

12、用酶标仪在450 nm处读数(5分钟内)

13x轴使用浓度值30,90,300,900,1800ug/gY轴使用OD值,使用四参数拟合标曲。根据Y值计算获得样本X

如需具体操作说明书,请。

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